Тип публикации: статья из журнала
Год издания: 2002
Ключевые слова: Murine single-chain Fv, Antibody phage display library, Phage display library, Affinity selection, granulocyte colony-stimulating factor, антитела одноцепочечные мышиные, фаговый дисплей scFv, аффинная селекция, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор
Аннотация: С целью создания фагового дисплея одноцепочечных антител (scFv) из спленоцитов неиммунизированных мышей получены фракции общей клеточной РНК и ДНК. Фрагменты ДНК, кодирующие вариабельные области легких и тяжелых цепей иммуноглобулинов, амплифицированы и выделены с использованием праймеров, специфичных к консервативным участкам этихПоказать полностьюгенов. В основу создания библиотеки положен принцип стохастического соединения фрагментов ДНК, кодирующих легкие и тяжелые цепи антител, с помощью ДНК-линкера, соответствующего последовательности аминокислот (Gly4Ser)3, в реакции лигирования. Библиотека scFv создана с использованием штамма Е. coli TG1 и фагмидного вектора pHEN1. Представительность полученной библиотеки составляла не менее 5 x 107 независимых рекомбинантных клонов. Выделены клоны, продуцирующие антитела к гранулоцитарному колониестимулирующему фактору человека. Охарактеризованы константы аффинности полученных scFv, величины которых для разных клонов варьировали в интервале от 2 x 104 до 1.8 x 107М-1. To develop a phage display of single-chain antibodies (scFv), fractions of total cell DNA and RNA were obtained from splenocytes of naive mice. The DNA fragments encoding variable regions of light and heavy immunoglobulin chains were amplified and isolated using primers specific to the conservative regions of these genes. The construction of the library was based on the principle of stochastic combining of the DNA fragments encoding the light and heavy antibody chains with the DNA linker, whose structure corresponded to the (Gly4Ser)3 sequence. The scFv library was constructed using the E. coli TG1 strain and the phagemid vector pHEN1. The repertoire of the library exceeded 5 x 107 independent recombinant clones. The clones producing antibodies to the granulocyte colony-stimulating human factor were isolated. The affinity constants of the resulting scFv were in the range of 2 x 104 to 1.8 x 107 M-1.
Журнал: Биоорганическая химия
Выпуск журнала: Т. 28, № 2
Номера страниц: 126-134
ISSN журнала: 01323423
Место издания: Москва
Издатель: Федеральное государственное унитарное предприятие "Академический научно-издательский, производственно-полиграфический и книгораспространительский центр Российской академии наук "Издательство "Наука"