Тип публикации: статья из журнала
Год издания: 2012
Аннотация: Предложен метод определения однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) на основе реакции удлинения праймера (PEXT) с последующим биолюминесцентным твердофазным микроанализом продуктов. В качестве репортеров использовали Са2+-регулируемый фотопротеин обелин и целентеразин-зависимую люциферазу Renilla muelleri. Исследования проводили на прПоказать полностьюимере генотипирования SNP гена, кодирующего коагуляционный фактор V человека ? FV Leiden (Лейденская мутация) 1691 Gimg src="/ItemImages/1016037/17726701/FO_3_1.gif" align=absmiddle border=0 A (R506Q). Геномную ДНК амплифицировали полимеразной цепной реакцией, используя праймеры, фланкирующие полиморфный сайт. Продукты ПЦР размером 140 п.о. использовали как матрицу для двух PEXT-реакций с праймерами, 3-концевые нуклеотиды которых комплементарны нормальному либо мутантному аллелям. При полной комплементарности матрицы и аллель-специфичного праймера происходило его удлинение ДНК-полимеразой, а полученный продукт содержал биотин, благодаря наличию в реакционной смеси биотинилированного производного дезоксиуридинтрифосфата (B-dUTP). Анализ продуктов проводили с использованием химических коньюгатов обелин-стрептавидин. Определены оптимальные условия проведения PEXT-реакции, позволяющие проводить генотипирование SNP с высокой достоверностью. Разработан вариант одновременного выявления обоих аллелей в одной лунке с использованием двух биолюминесцентных репортеров. Эффективность предлагаемого подхода показана при исследовании клинических образцов ДНК.
Журнал: Биоорганическая химия
Выпуск журнала: Т. 38, № 3
Номера страниц: 342
ISSN журнала: 01323423
Место издания: Москва
Издатель: Федеральное государственное унитарное предприятие Академический научно-издательский, производственно-полиграфический и книгораспространительский центр Наука