Тип публикации: статья из журнала
Год издания: 2008
Аннотация: Рекомбинантный Са2+-активируемый фотопротеин обелин использовали в качестве репортерного белка при проведении биолюминесцентного твердофазного анализа ДНК методом молекулярной гибридизации. Олигонуклеотидные зонды иммобилизовали на поверхности мелкодисперсного полимера или микробиологических планшет различных видов. В качестве выявПоказать полностьюляемой ДНК-матрицы использовали 30-звенный олигонуклеотид или его производное с остатком биотина на 3-конце, а также денатурированный двухцепочечный ПЦР-фрагмент вируса гепатита С (ВГС), в состав которого входила последовательность 30-звенного олигонуклеотида. Мечение зонда в составе гибридизационного комплекса проводили ферментативным удлинением цепи с помощью Taq-ДНК-полимеразы в присутствии биотинилированного дезоксиуридинтрифосфата. Результаты биолюминесцентного анализа сравнивали с результатами колориметрического анализа, полученными при использовании в качестве репортера щелочной фосфатазы. Показано, что использование биолюминесцентной обелиновой метки позволяет существенно ускорить процедуру выявления ДНК, обеспечивая при этом высокую чувствительность анализа (не ниже 10-15 моль ДНК-матрицы), и дает возможность количественной оценки содержания ДНК-матрицы в анализируемом образце.
Журнал: Биоорганическая химия
Выпуск журнала: Т. 34, № 6
Номера страниц: 792-798
ISSN журнала: 01323423
Место издания: Москва
Издатель: Федеральное государственное унитарное предприятие Академический научно-издательский, производственно-полиграфический и книгораспространительский центр Наука