Тип публикации: патент
Год издания: 2022
Аннотация: Изобретение относится к биотехнологии, генной и белковой инженерии и предназначено для получения генетически слитых гибридных белков. Предложены рекомбинантные плазмиды ДНК pFLAG-sc14D5a-NLuc-r1 и pFLAG-NLuc-r2-sc14D5a, содержащие уникальный ген одноцепочечного антитела мыши, направленного против белка Е вируса клещевого энцефалита, и гены фрагментов люциферазы NLuc-r1 и NLuc-r2. Предложен гибридный белок, экспрессирующийся в трансформированных упомянутыми плазмидными ДНК клетках Escherichia coli Rosetta-gami2 с последующими выделением из цитоплазматической фракции и очисткой металл-хелатной хроматографией гибридных белков sc14D5a-NLuc-r1 и NLuc-r2-sc14D5a. Изобретение позволяет получить два гибридных белка, обладающих способностью связывать белки Е вируса клещевого энцефалита с комплементацией фрагментов люциферазы NanoLuc и возникновением биолюминесцентной активности в присутствии субстрата - целентеразина, как потенциально пригодной высокочувствительной системы для выявления вируса клещевого энцефалита в биологических образцах однофазным биолюминесцентным анализом. 3 н.п. ф-лы, 9 ил., 6 пр. FIELD: biotechnology. SUBSTANCE: invention relates to biotechnology, genetic and protein engineering and is intended for the production of genetically fused hybrid proteins. Recombinant DNA plasmids pFLAG-sc14D5a-NLuc-r1 and pFLAG-NLuc-r2-sc14D5a containing a unique gene of a single-stranded mouse antibody directed against tick-borne encephalitis virus protein E and genes of NLuc-r1 and NLuc-r2 luciferase fragments are proposed. A hybrid protein is proposed, expressed in Escherichia coli Rosetta-gami2 cells transformed by the mentioned plasmid DNA, followed by isolation from the cytoplasmic fraction and purification by metal-chelate chromatography of hybrid proteins sc14D5a-NLuc-r1 and NLuc-r2-sc14D5a. EFFECT: present invention enables to obtain two hybrid proteins with the ability to bind tick-borne encephalitis virus proteins E with the complementation of NanoLuc luciferase fragments and the occurrence of bioluminescent activity in the presence of a substrate - celenterazine, as a potentially suitable highly sensitive system for detecting tick-borne encephalitis virus in biological samples by single-phase bioluminescent analysis. 3 cl, 9 dwg, 6 ex