Тип публикации: статья из журнала
Год издания: 2020
Идентификатор DOI: 10.15407/biotech13.05.062
Ключевые слова: plasminogen activator of tissue type (tPA), immunization, polyclonal antibodies, platelets, flow cytometry, тканевой активатор плазминогена (ТАП), иммунизация, поликлональные антитела, тромбоциты, проточная цитофлуориметрия, тканинний активатор плазміногену (ТАП), імунізація, поліклональні антитіла, тромбоцити, протокова цитофлуориметрія
Аннотация: Tissue plasminogen activator (tPA) is one of the key protein of plasminogen/plasmin system that converts plasminogen in the active proteinase plasmin. Platelets are able to bind both tPA and plasminogen on their surface, thus providing stimulatory effects on activation of zymogen. The present study was aimed to produce polyclonal aПоказать полностьюntibodies against tPA and characterize their immunochemical capacities for further application in flow cytometry assay to study interaction between tPA and platelets. The experimental methods involved immunization of rabbit with tPA, collection of immune serum, synthesis of tPA-containing immunoaffine sorbent, ELISA, and flow cytometry. Polyclonal monospecific antibodies against tPA with high affinity to the antigen (Кd = 4.05·10-9 М) were obtained. Flow cytometry assay based on the use of the produced antibodies showed the presence of binding sites for tPA on the plasma membrane of inactive platelets. Moreover, agonist stimulated platelets were revealed to expose more binding sites than their resting counterparts. Certain subpopulations of platelets that differ in the ability to bind tPA on their surface were also identified. Obtained data are of significant importance for further investigation of mechanisms underlying the role of platelets to regulate fibrinolytic rates. Тканевой активатор плазминогена (ТАП) - один из ключевых протеинов плазминоген/ плазминовой системы, который осуществляет превращение плазминогена в активную протеиназу плазмин. Тромбоциты, с поверхностью которых связываются плазминоген и тканевой активатор, оказывают стимулирующий эффект на реакцию активации. Целью работы было получение поликлональных антител к ТАП, изучение их иммунохимических свойств и исследование взаимодействия тканевого активатора с тромбоцитами методом проточной цитофлуориметрии. Использовали следующие экспериментальные подходы: иммунизация кролика тканевым активатором, получение иммунной антисыворотки, синтез иммуноаффинного сорбента на основе ТАП, иммуноэнзимный анализ (ELISA), проточная цитофлуориметрия. Получены поликлональные моноспецифические антитела к тканевому активатору, характеризующиеся высокой аффинностью к своемуантигену ( K d = 4,05·10-9 М). С помощью полученных антител методом проточной цитофлуориметрии показано, что на плазматической мембране неактивированных тромбоцитов есть сайты связывания тканевого активатора, количество которых увеличивается при агонистиндуцированной стимуляции клеток. Выявлены субпопуляции тромбоцитов, отличающиеся по способности связывать на своей поверхности ТАП. Полученные данные имеют важное значение для выяснения механизмов вовлечения тромбоцитов в регуляцию скорости фибринолитического процесса. Тканинний активатор плазміногену (ТАП) - один з ключових протеїнів плазміноген/плазмінової системи, який здійснює перетворення плазміногену на активну протеїназу плазмін. Тромбоцити, з поверхнею яких зв'язуються плазміноген і тканинний активатор, забезпечують стимулювальний ефект на реакцію активації. Метою роботи було отримати поліклональні антитіла до ТАП, вивчити їхні імунохімічні властивості та дослідити взаємодію тканинного активатора з тромбоцитами методом протокової цитофлуориметрії. Застосовували такі експериментальні підходи: імунізація кроля тканинним активатором, отримання імунної антисироватки, синтез імуноафінного сорбенту на основі тканинного активатора, імуноензимний аналіз (ELISA), протокова цитофлуориметрія. Одержано поліклональні моноспецифічні антитіла до тканинного активатора, що характеризувалися високою афінністю до антигену ( K d = 4,05 · 10-9 М). За допомогою антитіл методом протокової цитофлуориметрії показано, що на плазматичній мембрані неактивованих тромбоцитів є сайти зв'язування тканинного активатора, кількість яких збільшується за агоністіндукованої стимуляції клітин. Виявлено субпопуляції тромбоцитів, що відрізняються за здатністю зв'язувати на своїй поверхні тканинний активатор. Отримані дані мають важливе значення для з'ясування механізмів залучення тромбоцитів до регулювання швидкості фібринолітичного процесу.
Журнал: Biotechnologia Acta
Выпуск журнала: Т. 13, № 5
Номера страниц: 62-72
ISSN журнала: 24107751
Место издания: Киев
Издатель: Институт биохимии им. А.В. Палладина НАН Украины