Тип публикации: патент
Год издания: 2020
Аннотация: Изобретение относится к микробиологической промышленности, биотехнологии, генной и белковой инженерии и касается рекомбинантной плазмидной ДНК pET19b-SAV, обеспечивающей синтез полноразмерного белка стрептавидина, имеющей молекулярную массу 4 МДа и размер 6126 п.о. и содержащей, в соответствии с физической и генетической картой плаПоказать полностьюзмиды, сайты рестрикции NcoI, XhoI, NcoI-XhoI фрагмент ДНК плазмиды pET19b длиной 5643 п.о., включающий промотор T7lac, ген lacI белка-репрессора lac-оперона, ген β-лактамазы, определяющий резистентность к ампициллину при трансформации Е. coli, участок ori инициации репликации; фрагмент ДНК NcoI-XhoI размером 483 п.о., представляющий собой последовательность, кодирующую полноразмерный стрептавидин без лидерного пептида SEQ ID No. 1; а также штамма бактерий Escherichia coli - продуцента полноразмерного стрептавидина, полученного трансформацией культуры клеток Escherichia coli BL21-Codon Plus(DE3) плазмидной ДНК pET19b-SAV, имеющей нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 белка полноразмерного стрептавидина. Изобретение позволяет получить рекомбинантный штамм E. coli, обладающий способностью синтезировать стрептавидин с полноценной биологической активностью в раствор цитоплазмы, что упрощает процедуру получения высокоочищенного белка (одностадийная аффинная хроматография) по сравнению с получением стрептавидина из периплазматической, а также из нерастворимой фракций, требующего нескольких стадий очистки. 2 н.п. ф-лы, 4 ил., 3 пр.<br> FIELD: biotechnology.<br> SUBSTANCE: invention relates to microbiological industry, biotechnology, genetic and protein engineering and concerns recombinant plasmid DNA pET19b-SAV, which provides synthesis of full-size protein streptavidin, having molecular weight 4 MDa and size 6126 base pairs and containing, in accordance with physical and genetic map of plasmid, restriction sites of NcoI, XhoI, NcoI-XhoI DNA fragment of plasmid pET19b with length of 5643 base pairs, including T7lac promoter, lacI protein of lac protein repressor protein, gene β-lactamase, determining ampicillin resistance during E. coli transformation, a replication initiation ori; DNA fragment of NcoI-XhoI with size of 483 base pairs, which is a sequence coding full-length streptavidin without leader peptide SEQ ID No. 1; as well as Escherichia coli bacterium strain - producer of full-size streptavidin produced by transformation of cell culture Escherichia coli BL21-Codon Plus (DE3) plasmid DNA pET19b-SAV, having nucleotide sequence SEQ ID No. 1 protein of full-length streptavidin.<br> EFFECT: invention enables to obtain a recombinant Escherichia coli strain capable of synthesising streptavidin with complete biological activity into a cytoplasmic solution, which simplifies the procedure for obtaining highly purified protein (single-step affinity chromatography) compared to production of streptavidin from periplasmic, as well as from insoluble fractions, requiring several stages of purification.<br> 2 cl, 4 dwg, 3 ex<br>