БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ МОНИТОРИНГ ОБЕСПЕЧИВАЕТ ВОЗМОЖНОСТЬ РЕГИСТРАЦИИ ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ СОБЫТИЙ В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ БЕЗ РАЗРУШЕНИЯ КЛЕТОК И ТКАНЕЙ : научное издание

Описание

Перевод названия: Bioluminescence-based Real Time Monitoring of Intracellular Events without Disruption of Cells and Tissues

Тип публикации: статья из журнала

Год издания: 2017

Ключевые слова: melanoma, bioluminescent reporter, luciferase, coelenterazine, cell viability, меланома, биолюминесцентный репортер, люцифераза, целентеразин, жизнеспособность клеток

Аннотация: Секретируемые репортеры обеспечивают мониторинг внутриклеточных событий в реальном времени без разрушения клеток. Для создания клеточных линий меланомы человека с возможностью неинвазивного биолюминесцентного мониторинга метаболической активности проведено сравнение эффективности изоформ и мутантных вариантов люциферазы из MetridiaПоказать полностьюlonga в качестве секретируемых репортеров в клетках линии меланомы человека Mel IL. Из исследованных двух изоформ и двух делеционных мутантов секретируемой люциферазы M. longa при трансфекции клеток меланомы Mel IL наибольшую активность в среде обнаружил делеционный мутант MLM3. Установлено, что оптимизация структуры гена выбранного варианта MLM3 для экспрессии в клетках человека еще почти на порядок увеличивает уровень биолюминесцентной активности в клетках Mel IL. Стабильная клеточная линия меланомы Mel IL с конститутивной экспрессией гуманизированного репортера hMLM3 получена и охарактеризована. Линейный диапазон идентификации живых клеток по активности hMLM3 репортера составлял более трех порядков с чувствительностью детекции, достигающей 10 клеток. The secreted reporters provide a real time monitoring of intracellular events without disruption of cells. To create human melanoma cell lines with a possibility to monitor the metabolic activity noninvasively, the effectiveness of isoforms and mutant variants of the Metridia longa luciferase as secreted bioluminescent reporters was compared using human melanoma cell lines Mel IL. Out of the two isoforms and two deletion mutants of the M. longa luciferase studied, the deletion mutant MLM3 demonstrated the highest activity during the transfection of melanoma Mel IL cells in the medium. Gene optimization of the selected MLM3 variant for expression in human cells increases the level of bioluminescent activity in Mel IL cells' medium by almost an order. Stable melanoma cell line Mel IL with a constitutive expression of humanized reporter hMLM3 was produced and characterized. A linear range for identification of living cells by the activity of hMLM3 reporter was more than three orders of magnitude with detection sensitivity as few as 10 cells.

Ссылки на полный текст

Издание

Журнал: Биофизика

Выпуск журнала: Т. 62, 3

Номера страниц: 618-624

ISSN журнала: 00063029

Место издания: Москва

Издатель: Федеральное государственное унитарное предприятие Академический научно-издательский, производственно-полиграфический и книгораспространительский центр Наука

Авторы

Вхождение в базы данных