ВЫЯВЛЕНИЕ АЛЛЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ГЕНА С ПОМОЩЬЮ БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫХ РЕПОРТЕРОВ

Описание

Тип публикации: статья из журнала

Год издания: 2012

Аннотация: Предложен метод определения однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) на основе реакции удлинения праймера (PEXT) с последующим биолюминесцентным твердофазным микроанализом продуктов. В качестве репортеров использовали Са2+-регулируемый фотопротеин обелин и целентеразин-зависимую люциферазу <i>Renilla muelleri.</i> Исследования проводили на примере генотипирования SNP гена, кодирующего коагуляционный фактор V человека ? FV Leiden (Лейденская мутация) 1691 G<img src="/ItemImages/1016037/17726701/FO_3_1.gif" align=absmiddle border=0> A (R506Q). Геномную ДНК амплифицировали полимеразной цепной реакцией, используя праймеры, фланкирующие полиморфный сайт. Продукты ПЦР размером 140 п.о. использовали как матрицу для двух PEXT-реакций с праймерами, 3-концевые нуклеотиды которых комплементарны нормальному либо мутантному аллелям. При полной комплементарности матрицы и аллель-специфичного праймера происходило его удлинение ДНК-полимеразой, а полученный продукт содержал биотин, благодаря наличию в реакционной смеси биотинилированного производного дезоксиуридинтрифосфата (B-dUTP). Анализ продуктов проводили с использованием химических коньюгатов обелин-стрептавидин. Определены оптимальные условия проведения PEXT-реакции, позволяющие проводить генотипирование SNP с высокой достоверностью. Разработан вариант одновременного выявления обоих аллелей в одной лунке с использованием двух биолюминесцентных репортеров. Эффективность предлагаемого подхода показана при исследовании клинических образцов ДНК.

Ссылки на полный текст

Издание

Журнал: Биоорганическая химия

Выпуск журнала: Т.38, 3

Номера страниц: 342

ISSN журнала: 01323423

Место издания: Москва

Издатель: Федеральное государственное унитарное предприятие Академический научно-издательский, производственно-полиграфический и книгораспространительский центр Наука

Авторы

  • Красицкая В.В. (Институт биофизики СО РАН, 660036, Красноярск, Академгородок, стр. 50)
  • Буракова Л.П. (Институт биофизики СО РАН, 660036, Красноярск, Академгородок, стр. 50)
  • Пышная И.А. (Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск)
  • Франк Л.А. (Институт биофизики СО РАН, 660036, Красноярск, Академгородок, стр. 50)

Вхождение в базы данных