Тип публикации: научное издание
Год издания: 2019
Аннотация: Демонстрируется применение принципов биоинженерии для создания новых биолюминесцентных ферментативных методов и реагентов. Для решения проблемы обнаружения различных химических токсичных веществ для экологического мониторинга, анализа качества пищевых продуктов и медицинской диагностики предложена биолюминесцентная ферментативная пПоказать полностьюлатформенная технология на основе биферментной системы NADH-FMN-оксидоредуктаза и люцифераза светящихся бактерий. Токсические свойства анализируемых веществ и смесей определяют по изменению параметров биолюминесценции в присутствии анализируемых образцов по сравнению с контрольными значениями. Использование различных механизмов сопряжения ферментативных реакций с биферментной системой позволило разработать новые ферментативные методы, отличающиеся по чувствительности к различным классам токсикантов. Для обеспечения высокой активности и стабильности используемых в анализе ферментов было разработано семейство многокомпонентных реагентов «Энзимолюм», различающихся составом компонентов в зависимости от аналитической задачи. В составе реагента «Энзимолюм» присутствуют ферменты NADH:FMN-оксидоредуктаза и люцифераза и субстраты (миристиновый альдегид и NADH), иммобилизованные в крахмальный или желатиновый гель. Реагент представляет собой диск диаметром 6-7 мм, толщиной 50-60 мк, сухой вес которого 1,5 ± 0,2 мг. Разработаны способы увеличения чувствительности реагента к действию токсических веществ, подобраны условия проведения анализа, позволяющие определять содержание токсических веществ с максимальной эффективностью, соответствующей или ниже их уровня ПДК. Реагент сохраняет высокую ферментативную активность в течение не менее одного года, стабилен по отношению к денатурирующим воздействиям, а также может служить биологической основой для разработки биосенсора для анализа токсичности различных сред. Ферментативный биолюминесцентный анализ имеет ряд преимуществ по сравнению с традиционными биологическими методами тестирования, в том числе увеличивается точность и чувствительность анализа, сокращается время анализа, появляется возможность проведения анализа при высоком содержании органических веществ.
Журнал: Биофизика для экологии и медицины: К 90-летию академика РАН И.И. Гительзона
Номера страниц: 61-71
Место издания: Новосибирск
Издатель: Издательство Сибирского отделения РАН