ОЦЕНКА АКТИВНОСТИ ЛИЗОЦИМА ПОСЛЕ ЕГО КОВАЛЕНТНОЙ ИММОБИЛИЗАЦИИ НА НАНОАЛМАЗЫ ДЕТОНАЦИОННОГО СИНТЕЗА

Описание

Перевод названия: THE STUDY OF THE ACTIVITY OF LYSOZYME AFTER ITS COVALENT IMMOBILIZATION ON DETONATION-SYNTHESIZED NANODIAMONDS

Тип публикации: статья из журнала

Год издания: 2016

Ключевые слова: наноалмазы, лизоцим, ко-валентная иммобилизация фермента, анти-бактериальная активность, светящиеся бак-терии Photobacterium phosphoreum, nanodiamonds, lysozyme, Enzyme covalent immobilization, antibacterial activity, lumi-nescent bacteria Photobacterium phosphoreum

Аннотация: Проведена сравнительная оценка анти-бактериальной активности свободного и ко-валентно связанного с наноалмазами лизоци-ма с использованием в качестве модельной мишени грамотрицательных светоизлучаю-щих бактерий Photobacterium phosphoreum. Активность свободного и иммобилизованного фермента после добавления к клеточной сус-пензии оцеПоказать полностьюнивали по изменению величины ее оптической плотности. Ковалентную пришив-ку лизоцима проводили на поверхность нано-алмазов, активированную бензохиноном. Ус-тановлено, что количество иммобилизованно-го на наноалмазы лизоцима определяется ве-совым соотношением компонентов (фер-мент:наночастицы) на стадии ковалентной пришивки белка. Максимальная иммобилизация лизоцима (до 1 мг белка на 1 мг наночастиц) наблюдается при весовом соотношении фер-мент:наноалмазы - 6:1. Повышение количест-ва белка на стадии пришивки не увеличивает этот показатель. Сделано предположение, что дополнительным фактором, влияющим на эффективность ковалентного связывания ли-зоцима, по-видимому, является размер кла-стеров наночастиц. Установлено, что кова-лентно пришитый на наноалмазы лизоцим проявляет функциональную активность и вы-зывает лизис бактериальных клеток, что подтверждается снижением оптической плотности клеточной суспензии. Добавка к суспензии бактерий хелатора двухвалентных ионов ЭДТА (концентрация 2 мM) увеличивает эффект иммобилизованного фермента более чем в 2 раза. В сравнительных экспериментах показано, что активность лизоцима в составе комплекса наноалмазы-фермент снижена по сравнению с активностью свободного лизоци-ма. При равных концентрациях (25 мкг/мл) до-бавленного в клеточную суспензию свободного и иммобилизованного на наноалмазы лизоцима одинаковый показатель лизиса бактериальных клеток P. phosphoreum (снижение оптической плотности на 60-65%) регистрируется через 1 час и 3 часа соответственно. Обсуждаются причины наблюдаемого эффекта.

Ссылки на полный текст

Издание

Журнал: Вестник Красноярского государственного аграрного университета

Выпуск журнала: 8

Номера страниц: 38-44

ISSN журнала: 18194036

Место издания: Красноярск

Издатель: Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Красноярский государственный аграрный университет"

Авторы

  • Ронжин Н.О. (Институт биофизики СО РАН)
  • Посохина Е.Д. (Сибирский федеральный университет)
  • Барон А.В. (Институт биофизики СО РАН)
  • Бондарь В.С. (Институт биофизики СО РАН)

Вхождение в базы данных