Перевод названия: BIOLUMINESCENT BIOMODULE FOR ANALYSING TOXICITY OF VARIOUS MEDIA AND PREPARATION METHOD THEREOF
Тип публикации: патент
Год издания: 2011
Аннотация: p num="53"Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам получения иммобилизованных ферментов, и может быть использован в химии, биохимии, медицине, микробиологии, экологии и сельском хозяйстве для анализа веществ биолюминесцентным методом. Биомодуль содержит иммобилизованные в гель люциферазу, НАДН:ФМН-оксидоредуктаПоказать полностьюзу, миристиновый альдегид, НАДН, стабилизатор ферментов - дитиотрейтол в концентрации 1·10-4 M, раствор ФМН и подложку. Способ приготовления биомодуля включает приготовление 3-5% геля кипячением суспензии крахмала в фосфатном буфере или нагреванием суспензии желатина в фосфатном буфере до 60-80°С, охлаждение геля до 24-30°С, смешивание буферного раствора биферментной системы светящихся бактерий НАДН:ФМН-оксидоредуктаза-люцифераза, растворов мириетинового альдегида, восстановленного никотинамидадениндинуклеотида, стабилизатора ферментов - дитиотрейтола в концентрации 1·10-4 M с гелем, дозирование на подложку и высушивание при 4-10°С, при этом активируют биомодуль раствором флавинмононуклеотида. Изобретение позволяет увеличить выход активности и максимальной интенсивности свечения биомодуля в 1,3-3 раза, увеличить время постоянного уровня свечения биомодуля до 2-20 минут, увеличить время хранения биомодуля без потери активности в 2 раза, повысить термостабильность и устойчивость биомодуля к химическим факторам среды. 2 н.п. ф-лы, 12 ил. /p p num="54"FIELD: chemistry./p p num="55"SUBSTANCE: biomodule contains the following, immobilised into gel: nicotinamide adenine dinucleotide (NADN): flavine mononucleotide (FMN)-oxidoreductase, myristic aldehyde, NADN, enzyme stabiliser - dithiothreitol in concentration of 1·10-4 M, a FMN solution and a substrate. The method of preparing the biomodule involves preparation of 3-5% gel by boiling a starch suspension in a phosphate buffer or heating a gelatin suspension in a phosphate buffer to 60-80°C, cooling the gel to 24°-30°C, mixing the buffer solution of a bienzymatic system of luminescent bacteria NADN:FMN-oxidoreductase - luciferase, solutions of myristic aldehyde, reduced nicotinamide adenine dinucleotide, enzyme stabiliser - dithiothreitol in concentration of 1·10-4 M with gel, depositing onto the substrate and drying at 4-10°C. The biomodule is activated with a solution of flavin mononucleotide./p p num="56"EFFECT: invention increases activity output and maximum luminous intensity of the biomodule by 1,3-3 times, increases the time for constant illumination level of the biomodule to 2-20 minutes, increases the storage time of the biomodule without loss of activity by 2 times, increases thermal stability and resistance of the biomodule to chemical factors of the environment./p p num="57"2 cl, 12 dwg, 12 ex /p