Перевод названия: METHOD FOR ESTIMATING ANTIMYCOBACTERIAL ACTION OF ANTI-TUBERCULOSIS DRUGS USING BIOLOGICAL MATERIAL OF PATIENTS WITH PULMONARY TUBERCULOSIS
Тип публикации: патент
Год издания: 2019
Аннотация: p num="123"Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ оценки антимикобактериального действия противотуберкулезных препаратов с использованием биологического материала пациентов, больных туберкулезом легких, включающий забор биологического материала, культивирование в питательной среде, ее Показать полностьюзамену на свежую питательную среду в контрольной культуре и на такую же питательную среду в опытной культуре, дополнительно содержащую противотуберкулезный препарат, сопоставление роста микобактерий туберкулеза в контрольной и опытной культурах, где в качестве биологического материала используют образцы ткани легкого из операционного материала; получают из него ex vivo культуру альвеолярных макрофагов; культивируют ее в течение 1 суток в питательной среде; заменяют питательную среду на свежую в контрольной культуре клеток и на такую же среду с добавлением противотуберкулезного препарата в опытных культурах клеток, различающихся концентрациями одного и того же противотуберкулезного препарата; продолжают культивирование в течение трех дней; фиксируют клетки на покровных стеклах; окрашивают по методу Циля-Нильсена; проводят цитологический анализ на наличие признаков цитотоксического воздействия противотуберкулезного препарата на альвеолярные макрофаги; определяют доли альвеолярных макрофагов, содержащих микобактерии туберкулеза, от общего числа альвеолярных макрофагов в контрольной и опытной культурах клеток; при отсутствии признаков цитотоксического воздействия противотуберкулезного препарата на альвеолярные макрофаги в опытной культуре, отсутствии микобактерий в альвеолярных макрофагах или снижении доли альвеолярных макрофагов, содержащих микобактерии туберкулеза, в 2 и более раз в опытной культуре относительно контрольной делают положительное заключение об антимикобактериальном действии противотуберкулезного препарата и его минимальной концентрации, достаточной для достижения антимикобактериального эффекта, и при проведении цитологического анализа на наличие признаков цитотоксического воздействия противотуберкулезного препарата на альвеолярные макрофаги учитывают наличие ядра с признаками конденсации хроматина, и/или отсутствие целостности плазматической мембраны, и/или образование апоптозных телец, и/или разрушение клеток до отдельных участков цитоплазмы, и/или появление клеток без ядер; при наличии по меньшей мере одного из них делают заключение о наличии признаков цитотоксического воздействия. Изобретение позволяет сократить срок осуществления способа до 4 дней от момента получения биологического материала, обеспечение условий для оценки действия противотуберкулезных препаратов на микобактерии туберкулеза, находящиеся в альвеолярных макрофагах из операционного материала легких пациента, определение противотуберкулезного препарата и его концентрации, достаточной для достижения антимикобактериального действия на микобактерии пациента при отсутствии цитотоксического эффекта на альвеолярные макрофаги. 1 з.п. ф-лы, 6 ил., 5 табл., 7 пр./p p num="124"FIELD: biotechnology./p p num="125"SUBSTANCE: invention is a method for evaluating the anti-mycobacterial effect of anti-tuberculosis drugs using the biological material of patients with pulmonary tuberculosis, including the collection of biological material, cultivation in a nutrient medium, its replacement with fresh nutrient medium in the control culture and with the same nutrient medium in the experimental culture, additionally containing an anti-tuberculosis drug, comparison of the growth of mycobacterium tuberculosis in the control and experimental cultures, where samples of lung tissue from the surgical material are used as the biological material; ex vivo culture of alveolar macrophages is obtained from it; cultivating it for 1 day in a nutrient medium; replace the nutrient medium with fresh in the control cell culture and with the same medium with the addition of an anti-tuberculosis drug in experimental cultures of cells differing in concentrations of the same anti-tuberculosis drug; continue cultivation for three days; fix the cells on the cover glasses; stain according to the Ziehl-Nielsen method; carry out cytological analysis for the presence of signs of cytotoxic effects of the anti-TB drug on alveolar macrophages; determine the proportion of alveolar macrophages containing mycobacterium tuberculosis, of the total number of alveolar macrophages in the control and experimental cell cultures; in the absence of signs of a cytotoxic effect of the anti-TB drug on alveolar macrophages in an experimental culture, the absence of mycobacteria in alveolar macrophages or a decrease in the proportion of alveolar macrophages containing mycobacterium tuberculosis, 2 or more times in the experimental culture relative to the control, a positive conclusion is made about the anti-mycobacterial effect of the anti-tuberculosis drug and its minimum concentration sufficient to achieve the anti-mycobacterial effect, and when conducting a cytological analysis for the presence of signs of a cytotoxic effect of the anti-TB drug on alveolar macrophages, take into account the presence of a nucleus with signs of chromatin condensation, and/or lack of integrity of the plasma membrane, and/or the formation of apoptotic bodies, and/or destruction of cells to separate sections of the cytoplasm, and/or the appearance of cells without nuclei; in the presence of at least one of them make a conclusion about the presence of signs of cytotoxic effects./p p num="126"EFFECT: invention allows to reduce the duration of the method to 4 days from the date of receipt of biological material, the provision of conditions for evaluating the effect of anti-tuberculosis drugs on Mycobacterium tuberculosis, which are in alveolar macrophages from the patient's lung surgery material, determination of the anti-tuberculosis drug and its concentration sufficient to achieve an anti-mycobacterial effect on the patient's mycobacteria in the absence of a cytotoxic effect on the alveolar macrophages./p p num="127"1 cl, 6 dwg, 5 tbl, 7 ex/p